Trong sinh học phân tử, lựa chọn và chuẩn bị bộ đệm tốt cho các bước phân lập DNA khác nhau có thể là sự khác biệt giữa việc chuyển sang biểu hiện protein hoặc mở một bộ chuẩn bị maxi khác để bắt đầu lại. Mặc dù có tầm quan trọng quan trọng của chúng, các công thức nấu ăn đệm thường chỉ là các công thức nấu ăn được viết mà không có lời giải thích hoặc lý do cho các thành phần khác nhau. Một bộ đệm như vậy là bộ đệm glucose-tris-EDTA hoặc GTE.
$config[code] not foundGTE được sử dụng để làm gì?
GTE được sử dụng để nối lại các viên tế bào vi khuẩn trước khi lysing (phá vỡ) các tế bào và thu hoạch DNA plasmid bên trong. Lysozyme, làm mềm màng tế bào, thường được thêm vào cùng với bộ đệm GTE. Đạt được sự đình chỉ đồng nhất của toàn bộ các tế bào trong bước này để giải pháp ly giải được thêm vào sau đó có thể đến tất cả các tế bào là chìa khóa để có được năng suất DNA tốt. GTE được thiết kế để làm điều này đồng thời cung cấp môi trường ổn định cho DNA.
Glucose cho tính thẩm thấu
Đường glucose 50mM (millimole) được thêm vào bộ đệm GTE để duy trì tính thẩm thấu trong đó nồng độ chất tan bên ngoài các tế bào gần với bên trong các tế bào. Điều này ngăn chặn quá trình ly giải tế bào sớm, có thể khiến năng suất DNA thấp hơn do sự tổng hợp và suy thoái. Các thành phần khác của bộ đệm cũng góp phần vào tính thẩm thấu của dung dịch, nhưng glucose, không phải là chất điện phân, là một lựa chọn tốt vì nó không can thiệp vào tính chất đệm của dung dịch.
Tris cho độ ổn định pH
Tris là tên viết tắt của tris (hydroxymethyl) aminomethane, là một chất đệm pH rất phổ biến. Trong trường hợp đệm GTE, muối axit (Tris-HCl) được thêm vào dung dịch đệm ở nồng độ 25mM. Điều này duy trì độ pH của dung dịch ở mức gần sinh lý 8.0, độ pH lý tưởng để ngăn chặn quá trình thủy phân axit (thoái hóa) DNA plasmid và các phản ứng phụ không mong muốn của các thành phần tế bào khác.
EDTA ngăn chặn sự thoái hóa DNA
EDTA, hoặc axit ethylenediaminetetraacetic, bắt hoặc "loại bỏ" các ion kim loại ra khỏi dung dịch, ngăn chúng tham gia vào các phản ứng phụ không mong muốn. Trong bộ đệm GTE, EDTA được thêm vào ở mức 10mM. Mục đích chính của nó là trong bộ đệm để làm tròn kẽm, magiê và canxi tự do, do đó ngăn chặn sự thoái hóa DNA bằng các con đường nhất định cần các kim loại đó.
Một số lời khuyên quan trọng
Giữ bộ đệm GTE của bạn lạnh và làm cho nó với số lượng nhỏ để ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn ngoài ý muốn trong đó. Đường và độ pH được kiểm soát tạo ra một môi trường tăng trưởng tuyệt vời. Luôn luôn sử dụng nước tinh khiết. Nước máy có thể có quá nhiều ion kim loại từ các đường ống, có thể lấn át khả năng bắt giữ của EDTA. Nếu bạn nghi ngờ sự hiện diện của RNA can thiệp vào mẫu của bạn, hãy thêm RNase A ở mức 100 microgam trên mililit vào bộ đệm GTE của bạn để loại bỏ vấn đề.
